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細(xì)菌新型生化鑒定管使用說(shuō)明
―― 071740 沙門氏菌生化鑒定盒（10種×10次）管
一）整套試劑及用品
鑒定生化反應(yīng)的10種試劑(表1)、10瓶0.85%無(wú)菌生理鹽水、1瓶0.5 McFarland的濁度管、10支一次性吸管。
二）生化管的使用方法
開(kāi)啟西林瓶前，用75%酒精棉消毒西林瓶表面，在無(wú)菌條件下，按鋁蓋上的箭頭方向打開(kāi)鋁蓋，撕開(kāi)鋁蓋，打開(kāi)西林瓶膠塞（如圖1）。所有的西林瓶在使用后均高壓滅菌后方可棄去。
注意：氰化鉀生化管，應(yīng)盡量將膠塞套緊，以免氰化鉀揮發(fā)造成假陽(yáng)性！
三）沙門氏菌生化鑒定盒的詳細(xì)使用方法
沙門氏菌為需氧的革蘭氏陰性無(wú)芽胞桿菌，有動(dòng)力，有周鞭毛（但有無(wú)動(dòng)力的變種），最適溫度為37℃，最適pH為7.2～7.6，在固體培養(yǎng)基上37℃ 24h菌落可呈中等大小，光滑，圓形，濕潤(rùn)，隆起，在液體培養(yǎng)基內(nèi)生長(zhǎng)均勻渾濁。挑取平板分離的可疑菌落直接進(jìn)行三糖鐵瓊脂和營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)，將可疑菌落置于已配備的無(wú)菌生理鹽水，與0.5 McFarland的濁度管比濁，將菌懸液制備成0.5McFarland ( 約108cfu/mL )，用吸管吸取2滴（約0.06mL）菌懸液加入每種微量生化管內(nèi)。將已接種的西林瓶再套上膠塞，一般采用全加塞（如圖2左兩瓶所示），特殊情況在下表注明采用半加塞（如圖2右兩瓶所示），直立于內(nèi)托的凹槽內(nèi)（如圖2），或放置于合適的瓶架中，于35－37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，結(jié)果觀察見(jiàn)表1。
注意：如有特殊的接種方式、培養(yǎng)時(shí)間或培養(yǎng)方式，請(qǐng)?jiān)斠?jiàn)每種生化鑒定管附帶的使用說(shuō)明。
四）沙門氏菌生化鑒定特征
自選擇性瓊脂平板上直接挑取數(shù)個(gè)可疑菌落，分別接種三糖鐵瓊脂在三糖鐵瓊脂內(nèi)，腸桿菌科常見(jiàn)屬種的反應(yīng)結(jié)果見(jiàn)表2。
蛋白胨水（供靛基質(zhì)試驗(yàn)）、尿素瓊脂（PH7.2）、氰化鉀利用試驗(yàn)可在與三糖鐵瓊脂和賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)同時(shí)進(jìn)行，也可在三糖鐵瓊脂和賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)出結(jié)果后，再?gòu)臓I(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上挑取可疑菌落純物進(jìn)行測(cè)試，按表3判定結(jié)果。將已挑菌落的平板儲(chǔ)存于2℃～5℃或室溫至少保留24h，以備必要時(shí)復(fù)查。
反應(yīng)序號(hào)A1：典型反應(yīng)判定為沙門氏菌屬。如尿素、氰化鉀和賴氨酸3項(xiàng)中有1項(xiàng)異常，按表4可判定為沙門氏菌。如有2項(xiàng)異常為非沙門氏菌。
反應(yīng)序號(hào)A2：補(bǔ)做甘露醇和山梨醇試驗(yàn)，沙門氏菌靛基質(zhì)陽(yáng)性變體兩項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果均為陽(yáng)性，但需要結(jié)合血清學(xué)鑒定結(jié)果進(jìn)行判定。
反應(yīng)序號(hào)A3：補(bǔ)做ONPG試驗(yàn)，ONPG陰性為沙門氏菌，同時(shí)賴氨酸脫羧酶陽(yáng)性，甲型副傷寒沙門氏菌為賴氨酸脫羧酶陰性。
