食品國家安全標(biāo)準(zhǔn) 4789.5-2012志賀氏菌的檢驗(yàn)
發(fā)布時間：2019-09-03 瀏覽次數(shù)：4529
志賀氏菌屬通稱痢疾桿菌，革蘭氏陰性桿菌，無鞭毛、無動力。不產(chǎn)生莢膜和芽胞。長約2～3um，寬0.5～0.7um 。分為4個群：A群（痢疾志賀氏菌）、B群（福氏志賀氏菌）、C群（鮑氏志賀氏菌）、D群（宋內(nèi)氏志賀氏菌）。
1、增菌培養(yǎng)
樣品25g加入含新生霉素的250mL志賀氏增菌肉湯中，將此混懸液均質(zhì)混勻，置于41.5±1℃，16-20h厭氧培養(yǎng)。
? 志賀氏菌增菌肉湯
? 培養(yǎng)基中除胰蛋白胨、葡萄糖外，加入新生霉素作抑菌劑，并加入少量的吐溫80作增溶劑，以幫助樣品的充分分散。41℃厭氧培養(yǎng)有助于抑制其它雜菌生長。
2、志賀氏菌的分離
取增菌后志賀氏菌增菌液劃線接種在XLD瓊脂平板或者M(jìn)AC瓊脂或者志賀顯色培養(yǎng)基上，36±1℃培養(yǎng)20h~24h。如果菌落太小或者不典型，則繼續(xù)培養(yǎng)到48h再觀察。
麥康凱瓊脂上的51572
XLD瓊脂上的51572
顯色培養(yǎng)基平板上的志賀氏菌
3、初步生化實(shí)驗(yàn)
挑取選擇性平板上的2個或2個以上典型菌落，分別接種TSI、半固體和營養(yǎng)瓊脂斜面各一管，36±1℃培養(yǎng)20h~24h。
凡是三糖鐵瓊脂斜面產(chǎn)堿、底層產(chǎn)酸、不產(chǎn)氣（福氏志賀氏菌6型可產(chǎn)生少量氣體）、不產(chǎn)硫化氫、半固體管中無動力的菌株，挑取用上一步已培養(yǎng)的營養(yǎng)瓊脂斜面上生長的菌苔，進(jìn)行進(jìn)一步生化和血清學(xué)分型。
4、進(jìn)一步生化實(shí)驗(yàn)
將已培養(yǎng)的營養(yǎng)瓊脂生長的菌苔，進(jìn)行生化實(shí)驗(yàn)，即β-半乳糖苷酶，尿素，賴氨酸脫羧酶，鳥氨酸脫羧酶以及水楊苷和七葉苷的分解實(shí)驗(yàn)。必要時補(bǔ)充做靛基質(zhì)，甘露醇，棉子糖，甘油，革蘭氏染色以及氧化酶實(shí)驗(yàn)。對于生化反應(yīng)不符合的菌株，即使可以與某種血清凝集，但仍不能判定。因某些不活潑的大腸埃希氏菌的生化與志賀氏菌相似，并可以與血清凝集，所以對前面生化符合志賀氏菌屬的培養(yǎng)物外加葡萄糖胺、西蒙氏檸檬酸鹽、粘液酸鹽試驗(yàn)36℃培養(yǎng)24h-48h。
5、血清學(xué)鑒定
志賀氏菌沒有動力，所以沒有鞭毛抗原。志賀菌屬主要有菌體O抗原。宋內(nèi)志賀氏菌沒有K抗原。如生化項(xiàng)目符合志賀氏菌的生化特征，而血清陰性的話，可挑取菌苔制成濃菌液，100℃煮沸15min-60min去除K抗原后再檢查。
