潔凈環(huán)境監(jiān)測用無菌平板培養(yǎng)基適用性檢查注意事項
發(fā)布時間：2022-11-28 瀏覽次數(shù)：7506
潔凈環(huán)境監(jiān)測用無菌平板培養(yǎng)基屬于商品化的預(yù)制培養(yǎng)基。在2020版中國藥典<9203>藥品微生物實驗室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則中明確了 “微生物實驗室使用的培養(yǎng)基可直接采用商品化的預(yù)制培養(yǎng)基。”
目前潔凈環(huán)境監(jiān)測用培養(yǎng)基主要是胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基（TSA），該培養(yǎng)基為可滿足廣泛微生物生長的廣譜性培養(yǎng)基，此外還可用適合霉菌酵母生長用的沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（SDA）。
為保證潔凈環(huán)境監(jiān)測用培養(yǎng)基質(zhì)量符合潔凈環(huán)境空氣及表面微生物檢測的使用要求，使用前應(yīng)進行適用性技術(shù)性驗收。那么這類培養(yǎng)基的適用性檢查該怎么做？有法可依嗎？有的??！
2020版中國藥典<9203>關(guān)于環(huán)境監(jiān)控培養(yǎng)基的質(zhì)量控制指導(dǎo)說明 “用于環(huán)境監(jiān)控的培養(yǎng)基須特別防護，以防止外來污染物的影響及避免出現(xiàn)假陽性結(jié)果?！焙唵蔚恼f就是環(huán)境監(jiān)控的培養(yǎng)基應(yīng)無菌。另外，由于該類培養(yǎng)基的主要作用是將潔凈環(huán)境中我們?nèi)庋劭床灰姷奈⑸锱嘤饰覀內(nèi)庋劭梢姷木洌ㄟ^菌落數(shù)評估環(huán)境微生物污染情況，也就是微生物計數(shù)，因此，從這類培養(yǎng)基質(zhì)量評價還需考慮對微生物促生長的能力。
總的來說，潔凈環(huán)境監(jiān)測用無菌平板培養(yǎng)基應(yīng)符合培養(yǎng)基的無菌性檢查及促生長靈敏度檢查的要求。
1、潔凈環(huán)境監(jiān)測用無菌平板培養(yǎng)基的無菌性檢查
從每批無菌平板培養(yǎng)基中隨機抽取包裝完整的若干包（具體根據(jù)采購數(shù)量確定），將包裝完整的預(yù)灌裝TSA置于30-35℃溫度培養(yǎng)5天，包裝完整的預(yù)灌裝SDA置于20-25℃溫度培養(yǎng)7天，應(yīng)無菌生長。
操作注意：
1）由于環(huán)凱提供的三層包無菌平板培養(yǎng)基采用的是非真空包裝形式，包裝內(nèi)不缺氧氣，因此，無菌檢查培養(yǎng)無需拆包，完整包裝狀態(tài)培養(yǎng)不影響污染微生物的生長，結(jié)果直接客觀評價培養(yǎng)基的無菌性。
2）非真空包裝設(shè)計的無菌平板培養(yǎng)基，在2℃-25℃儲存期間相當(dāng)于100%低溫預(yù)培養(yǎng)，進一步保證培養(yǎng)基的無菌性。
2、潔凈環(huán)境監(jiān)測用無菌平板培養(yǎng)基的促生長靈敏度檢查
由于潔凈環(huán)境監(jiān)測用無菌平板培養(yǎng)基的用途也是需氧兼性厭氧細(xì)菌霉菌酵母等微生物計數(shù)，因此，此類培養(yǎng)基的促生長靈敏度檢查，可參考《中國藥典》2020版四部“1105非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數(shù)法”規(guī)定，培養(yǎng)基適用性以回收率和菌落形態(tài)作為判定標(biāo)準(zhǔn)（詳見表1 ）
操作注意：
1）試驗用菌株的傳代次數(shù)不得超過5代（從菌種保藏中心獲得的干燥菌種為0代），并采用適宜的菌種保藏技術(shù)進行保存，以保證試驗菌株的生物學(xué)特性。
2）接種測試培養(yǎng)基的測試菌量為不大于100CFU/皿，按藥典菌液制備方法，需把控好適宜濃度的選擇；也可選擇商品化定量菌種替代傳統(tǒng)方法的菌液制備。
3）涂布接種時需注意，如采用火焰灼燒滅菌的涂布棒，涂布前需冷卻至室溫再涂布；涂布時可順時針、逆時針在培養(yǎng)基表面打圈涂布若干圈，使菌液均勻涂布在培養(yǎng)基表面，菌液被培養(yǎng)基基本吸干即停止涂布。涂布圈數(shù)根據(jù)培養(yǎng)基對菌液吸收程度確定。
4）如菌液被培養(yǎng)基吸干還繼續(xù)涂布，對個別微生物（如，大腸埃希氏菌、銅綠假單胞菌）其菌體細(xì)胞會造成機械損傷，導(dǎo)致回收率下降。
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