產(chǎn)品名稱：創(chuàng)傷弧菌 PCR 檢測(cè)試劑盒
英文名稱：PCR Detection Kit for Vibrio vulnificus
產(chǎn)品編號(hào)與包裝規(guī)格：
| 編號(hào) | 規(guī)格 |
|---|---|
| KJD14P | 24 測(cè)試/盒 |
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：本試劑盒基于 PCR 技術(shù)，并適用于魚(yú)、蝦、蟹、貝類等水產(chǎn)品中創(chuàng)傷弧菌的檢測(cè)。
檢測(cè)原理：利用特異性引物和 PCR 反應(yīng)所需其他試劑，如反應(yīng)緩沖液、dNTPs 以及 Taq DNA 聚合酶等，加入待檢 DNA 模板樣品，即可進(jìn)行PCR 擴(kuò)增反應(yīng)。經(jīng)比對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物目標(biāo)條帶即可判定創(chuàng)傷弧菌 vvhA 基因。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
1. 快速簡(jiǎn)便：將酶、引物等反應(yīng)組分混勻后進(jìn)行干粉化處理，增加試劑穩(wěn)定性，使用時(shí)減少溶液配制步驟，更為便捷，整個(gè)檢測(cè)反應(yīng)可在 3 h 內(nèi)完成；
2. 特異性高：按照 GB 4789.44?2020《食品微生物學(xué)檢驗(yàn)創(chuàng)傷弧菌檢驗(yàn)》提供的目標(biāo)基因引物，保證擴(kuò)增反應(yīng)的高度特異性；
3. 判讀簡(jiǎn)單：擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳和紫外儀觀察目標(biāo)條帶即可判別，直觀方便。
創(chuàng)傷弧菌 PCR 檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品組分：
儲(chǔ)存條件與保質(zhì)期：2~8℃條件下儲(chǔ)存，有效期為 12 個(gè)月。
所需其他材料和適用儀器：
1、PCR 儀器、高速離心機(jī)、電泳儀、水平電泳槽、紫外儀、移液器、移液槍頭及離心管等；
2、瓊脂糖、溴化乙錠（EB）或其他核酸染料。
創(chuàng)傷弧菌 PCR 檢測(cè)試劑盒使用指南：
1，樣品前處理：
1) 參照 GB 4789.44?2020，取經(jīng) 36℃±1℃培養(yǎng) 18 h±1 h 樣品 PNCC 增菌液 1 mL 至無(wú)4 菌離心管中，12000 r/min 離心 2 min，棄上清，加入 30 μL 裂解液，充分懸浮，轉(zhuǎn)移至 0.2 mL 無(wú)菌離心管中，輕彈管壁消除氣泡，99℃加熱 10 min；
2) 參照 GB 4789.44?2020，挑取可疑菌落半環(huán)到含 30 μL 裂解液的無(wú)菌離心管中，充分懸浮，輕彈管壁消除氣泡，99℃加熱10 min。
3) 12000 r/min 離心 15 min，上清即為粗提的 DNA，可轉(zhuǎn)移至 0.2 mL 無(wú)菌離心管中，在-20℃下可長(zhǎng)期保存。
2, 加樣、反應(yīng)
1) 首次使用時(shí)，分別加入 80 μL 超純水至陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照管中，充分溶解，-20℃存儲(chǔ)待用；
2) 取出干粉試劑，按照需求分別剪取 n 個(gè)檢測(cè)試劑管（n=待檢測(cè)樣品數(shù)+1 管陽(yáng)性對(duì)照+1 管陰性對(duì)照），每管加入 18 μL 復(fù)溶液，充分溶解后待用；
3) 向上述已加入復(fù)溶液的 n 個(gè)反應(yīng)管中分別加入待測(cè)樣品核酸、陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照各 2 μL，緊蓋后置于 PCR 儀中按設(shè)定的反應(yīng)程序進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)；
4) PCR 反應(yīng)程序如下：
3, 結(jié)果判讀：反應(yīng)后每管中加入 4 μL 6×Loading buffer，混勻，并取 8 μL 經(jīng) 1.5%瓊脂糖凝膠電泳，在紫外儀下觀察，陰性對(duì)照無(wú)條帶擴(kuò)增，陽(yáng)性對(duì)照中出現(xiàn)目標(biāo)條帶（參照?qǐng)D 1），PCR試驗(yàn)結(jié)果成立。根據(jù)每個(gè)樣品對(duì)應(yīng)的反應(yīng)產(chǎn)生的目標(biāo)條帶，即可判斷創(chuàng)傷弧菌 vvhA 基因是否檢出。若陰陽(yáng)性對(duì)照管反應(yīng)結(jié)果不符，則本次檢測(cè)結(jié)果無(wú)效，應(yīng)重新檢測(cè)或與產(chǎn)品技術(shù)支持聯(lián)系。
