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耐酸耐熱菌(庫克)的檢測方法

發(fā)布時間:2019-11-25    瀏覽次數(shù):3181

1、適用范圍

本方法適用于清汁、濁汁、水和濃縮果汁中的耐酸耐熱菌的檢測。

2、儀器和試劑

2.1  恒溫水?。?0±1℃。

2.2  恒溫培養(yǎng)箱:40±1℃。

2.3  滅菌培養(yǎng)皿:直徑為90mm。

2.4  滅菌試管:18×180mm。

2.5  濾膜:0.45um水系一次性濾膜。

2.6  酵母粉。

2.7  蛋白胨。

2.8  瓊脂粉。

2.9  葡萄糖。

2.10 吐溫80。

2.11 12.5%蘋果酸。

2.12 滅菌蒸餾水。

2.13  K氏培養(yǎng)基平板:在1000ml的三角瓶中放入500ml蒸餾水,加入1.25g酵母粉、2.50g蛋白胨、6.50g瓊脂粉、0.5g 葡萄糖和0.5ml吐溫80,使其溶解,輕輕蓋上三角瓶的蓋子,在121℃滅菌25分鐘;在一個小燒杯中加入10ml蒸餾水和1.25克的蘋果酸,攪拌直至溶解,將蘋果酸的水溶液用0.45um的濾膜過濾,將處理過的蘋果酸水溶液加入到滅菌的K氏培養(yǎng)基中,攪拌均勻,使其pH值達到3.7±0.1。當冷卻到大約50℃時,將K氏培養(yǎng)基傾注到培養(yǎng)皿中,凝固后在0-5℃的冰箱中儲存,有效期60天,并記錄配制日期。

3、操作步驟

3.1 樣品處理

3.1.1 濃縮清汁:

打開水浴鍋,調整溫度到80±1℃。以無菌操作,取10ml濃縮清汁于15ml滅菌的試管中,再移取10ml濃縮清汁于另一帶有溫度計的15mL的試管中,作為溫度控制用,蓋上樣品試管的蓋子。將上述樣品試管和溫度控制試管放在水浴鍋中,當溫度達到80±1℃,開始計時,維持13分鐘(用計時器計時)。冷卻至室溫,用90-100ml的滅菌蒸餾水將熱處理過的樣品轉入滅菌容器中,搖勻。將稀釋后的樣品溶液用0.45um濾膜真空過濾。

3.1.2 清汁、水:

打開水浴鍋,調整溫度到80±1℃。以無菌操作,取150ml清汁(或水)于已滅過菌的玻璃樣品瓶中,再移取150ml清汁(或水)于另一帶有溫度計的玻璃樣品瓶中,作為溫度控制用,蓋上樣品瓶的蓋子。將上述樣品試管和溫度控制試管放在水浴鍋中,當溫度達到80±1℃,開始計時,維持13分鐘(用計時器計時)。將熱處理過的樣品冷卻至室溫,用0.45um的濾膜真空過濾。

3.1.3 濁汁:

打開水浴鍋,調整溫度到80±1℃。以無菌操作,取20ml濁汁于已滅過菌的試管中,再移取20ml濁汁于另一帶有溫度計的20mL的試管中,作為溫度控制用,蓋上樣品試管的蓋子。將上述樣品試管和溫度控制試管放在水浴鍋中,當溫度達到80±1℃時,開始計時,維持13分鐘(用計時器計時)。冷卻至室溫,將熱處理的樣品用0.45um濾膜真空過濾。

3.2 培養(yǎng)及計數(shù)

取掉過濾器的上部裝置,用滅菌的鑷子,將過濾膜從過濾器上取下放在K氏培養(yǎng)基上,輕敲數(shù)次,以保證濾膜與培養(yǎng)基接觸。倒置于40-41℃恒溫培養(yǎng)箱中,在恒溫培養(yǎng)箱底部放置一個有水的盤子,以調整恒溫培養(yǎng)箱的濕度,培養(yǎng)5天。培養(yǎng)結束后,記錄該培養(yǎng)溫度下濾膜上的菌落數(shù)。

根據(jù)對樣品的污染情況,可選擇稀釋度。用滅菌吸管吸取25ml樣品,加入到225ml滅菌蒸餾水中,做成1:10的稀釋度;用滅菌吸管吸取1:10的稀釋液25ml,加入到225ml滅菌蒸餾水中,做成1:100的稀釋度,稀釋后的樣品的檢測方法同上。培養(yǎng)結束后,記錄濾膜上的菌落數(shù),并按相應的稀釋度進行計算。

4、數(shù)據(jù)處理

結果報告10ml的濃縮清汁樣品中含有的菌落數(shù),報告單位為cfu/10ml。

結果報告150ml的清汁(或水)樣品中含有的菌落數(shù),報告單位為cfu/150ml。

結果報告20ml的濁汁樣品中含有的菌落數(shù),報告單位為cfu/20ml。

5、參考資料

庫克實驗室耐熱耐酸菌的檢測方法。

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