食品微生物檢驗(yàn)副溶血性弧菌檢驗(yàn)常用培養(yǎng)基原理解析
發(fā)布時(shí)間：2020-11-26 瀏覽次數(shù)：11442
?蛋白胨提供碳源、氮源、維生素、生長(zhǎng)因子；高含量氯化鈉和高pH值可以抑制非弧菌類細(xì)菌生長(zhǎng)，不影響副溶血性弧菌生長(zhǎng)。
硫代硫酸鹽-檸檬酸鹽-膽鹽-蔗糖（TCBS）瓊脂
?配方中多價(jià)蛋白胨、酵母膏粉提供碳氮源、維生素和生長(zhǎng)因子；氯化鈉可刺激弧菌的生長(zhǎng)；蔗糖是可發(fā)酵的糖類；膽酸鈉、牛膽汁粉、硫代硫酸鈉和檸檬酸鈉及較高的pH可抑制革蘭氏陽性菌和大腸菌群；硫代硫酸鈉與檸檬酸鐵反應(yīng)作為檢測(cè)硫化氫產(chǎn)生的指示劑；溴麝香草酚藍(lán)和麝香草酚藍(lán)是pH指示劑；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑 。
?副溶血性弧菌不發(fā)酵蔗糖，不會(huì)使培養(yǎng)基pH降低，因而在該培養(yǎng)基上為綠色菌落，創(chuàng)傷和擬態(tài)弧菌都不發(fā)酵蔗糖，需進(jìn)一步確證鑒定，霍亂弧菌發(fā)酵蔗糖為黃色。
副溶血性弧菌為綠色菌落
?配方中蛋白胨和酵母膏粉提供氮源、維生素、氨基酸和碳源；蔗糖為可發(fā)酵的糖類；抑菌劑抑制大部分非弧菌細(xì)菌，氯化鈉可維持均衡的滲透壓；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑；混合色素與副溶血性弧菌、霍亂弧菌和創(chuàng)傷弧菌所對(duì)應(yīng)的酶發(fā)生特異性反應(yīng)，水解底物，釋放出顯色基團(tuán)，在淡黃色平板上產(chǎn)生品紅色菌落(副溶血性弧菌)和綠-藍(lán)綠色的菌落(霍亂弧菌和創(chuàng)傷弧菌)。
副溶血性弧菌為品（紫）紅色菌落
3％氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂
?胰蛋白胨、大豆蛋白胨提供氮源、維生素、生長(zhǎng)因子；高含量氯化鈉可以抑制非弧菌類細(xì)菌生長(zhǎng)，不影響副溶血性弧菌生長(zhǎng)；瓊脂為凝固劑。
氧化酶試驗(yàn)
? 原理：氧化酶使細(xì)胞色素C氧化，氧化型細(xì)胞色素C再氧化對(duì)苯二胺試劑形成紫色復(fù)合物，產(chǎn)生顏色反應(yīng)。
操作：滴加1滴氧化酶試劑到一小塊潔凈濾紙上，用玻棒或接種環(huán)（鉑或塑料）挑取適量新鮮菌苔涂在試劑潤(rùn)濕的紙片上；30秒內(nèi)出現(xiàn)藍(lán)紫色為陽性，延遲反應(yīng)或無顏色變化為陰性。
?蛋白胨、牛肉膏粉提供氮源、維生素、礦物質(zhì)；乳糖、葡萄糖、蔗糖為可發(fā)酵糖類，其產(chǎn)酸時(shí)通過酚紅指示劑測(cè)出，酸性呈黃色，堿性呈紅色；硫代硫酸鈉可被某些細(xì)菌還原為硫化氫，與硫酸亞鐵中的鐵鹽生成黑色硫化鐵；較高含量的氯化鈉維持弧菌均衡的滲透壓；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。
副溶血性弧菌在3％氯化鈉三糖鐵瓊脂上的特征
嗜鹽性試驗(yàn)
?挑取純培養(yǎng)的單個(gè)可疑菌落，分別接種0%、6%、8%和10%不同氯化鈉濃度的胰胨水，36℃±1℃培養(yǎng)24 h，觀察液體混濁情況。副溶血性弧菌在無氯化鈉和10%氯化鈉的胰胨水中不生長(zhǎng)或微弱生長(zhǎng)，在6%氯化鈉和8%氯化鈉的胰胨水中生長(zhǎng)旺盛。
賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基
?具有氨基酸脫羧酶的細(xì)菌，能分解氨基酸使其脫羧生成胺（賴氨酸→尸胺）和二氧化碳，使培養(yǎng)基變堿，使指示劑顯示出來。
?結(jié)果判讀：陽性為試驗(yàn)管為綠色-藍(lán)綠色，對(duì)照管變黃色； 陰性為試驗(yàn)管和對(duì)照管均變黃色，或均不變色。
3%氯化鈉甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)
?絕大多數(shù)細(xì)菌利用糖（醇）類作為碳源和能源，代謝產(chǎn)酸（如乳酸、醋酸、丙酸等），使酸堿指示劑變色來斷定。
?（指示劑為溴甲酚紫）結(jié)果判讀：陽性為變黃色； 陰性為紫色。
3%氯化鈉甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)
3%氯化鈉葡萄糖磷酸鹽胨水（VP試驗(yàn)）
?某些細(xì)菌能分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，并進(jìn)一步將丙酮酸脫羧成為乙酰甲基甲醇，后面在堿性環(huán)境下被空氣中的氧氧化成為二乙酰，進(jìn)而與培養(yǎng)基中的精氨酸等所含的胍基結(jié)合，形成紅色的化合物，即VP試驗(yàn)陽性。
我妻氏血瓊脂（神奈川試驗(yàn)）
?酵母膏粉、蛋白胨提供氮源、維生素、生長(zhǎng)因子；高含量氯化鈉可以抑制非弧菌的細(xì)菌生長(zhǎng)，不影響副溶血性弧菌生長(zhǎng)；磷酸氫二鉀為pH緩沖劑；甘露醇為可發(fā)酵的醇；結(jié)晶紫抑制革蘭氏陽性菌，特別抑制革蘭氏陽性桿菌和糞鏈球菌；兔血紅細(xì)胞用于檢測(cè)副溶血性弧菌是否具有特定溶血素；瓊脂為凝固劑。
?陽性結(jié)果為菌落周圍呈半透明環(huán)的β溶血。
副溶血性弧菌神奈川試驗(yàn)陽性
ONPG試驗(yàn)
?β-半乳糖苷酶試驗(yàn)是以有些細(xì)菌可產(chǎn)生β半乳糖苷酶，能分解鄰硝基酚-β半乳糖苷(ONPG)，生成黃色的鄰硝基酚。
ONPG試驗(yàn)
