生長曲線法評(píng)估膽鹽抑菌能力
發(fā)布時(shí)間：2022-11-02 瀏覽次數(shù)：4914
為了精確評(píng)估膽鹽的抑菌能力，正確指導(dǎo)不同種類、不同批次膽鹽的最適用量。趙貴明等人利用全自動(dòng)生長曲線分析儀，設(shè)置對(duì)照品和固定測(cè)試菌株，通過比較對(duì)照品膽鹽與測(cè)試品膽鹽對(duì)于敏感性測(cè)試菌株的 MIC 和 MBC 值，得以精確測(cè)定膽鹽的效價(jià)。通過此方法，比較了不同品牌不同批次的膽鹽對(duì)不同菌的抑制效果，很好的指導(dǎo)了膽鹽的最適用量。具體內(nèi)容如下：
(1)測(cè)試用菌株及試劑
藤黃微球菌(Micrococcus Luteus )菌種號(hào)(ATCC 49732)或表皮葡萄球菌( Staphylo-coccus epidermidis )菌種號(hào)(ATCC 12228)、3號(hào)膽鹽(Oxoid)、磷酸鹽緩沖溶液、生理鹽水、待測(cè)膽鹽、去氧膽酸鈉，哥倫比亞血瓊脂平板(Oxoid)、TSB液體培養(yǎng)基(Oxoid)。
(2)儀器設(shè)備
恒溫培養(yǎng)箱、高壓滅菌鍋、微量移液器(20μL~200μL、100μL~1000uL)、麥?zhǔn)媳葷峁?/span>、比濁儀、Bioscreen全自動(dòng)生長曲線分析儀。
(3)菌懸液的制備
將敏感性測(cè)試菌株活化后接種于哥倫比亞血瓊脂平板，經(jīng)36°C±1°C培養(yǎng) 18h~24h，直至出現(xiàn)明顯菌落。挑取3~5個(gè)菌落，分散于TSB液體培養(yǎng)基中制成菌懸液。將菌懸液的濁度調(diào)整至0.5 麥?zhǔn)媳葷針?biāo)準(zhǔn)，此時(shí)菌懸液的濃度為 1.5×10? CFU/mL。
(4)不同濃度膽鹽培養(yǎng)基的制備
向TSB液體培養(yǎng)基中加人作為標(biāo)準(zhǔn)的 Oxoid 3號(hào)膽鹽，配置成膽鹽濃度分別為0.05%、0.1%、0.15%、0.2%、0.25% 和 0.3% 的TSB液體培養(yǎng)基。其他待測(cè)膽鹽按照相應(yīng)比例配成相應(yīng)的 TSB液體培養(yǎng)基，待測(cè)膽鹽濃度最大設(shè)置為 0.5%。
(5) MIC 和 MBC 的測(cè)定
取30μL菌懸液接種于 270μL 相應(yīng)的含膽鹽的TSB培養(yǎng)基中，置于 Bioscreen 全自動(dòng)生長曲線分析儀中，37°C培養(yǎng)48h，每15min 測(cè)一次濁度值。測(cè)試菌株的生長曲線見圖4-7-2。每個(gè)實(shí)驗(yàn)測(cè)試 3 個(gè)平行樣，取平均值繪制菌種生長曲線，最小抑菌濃度 MIC 是膽鹽能夠完全抑制細(xì)菌生長的最低藥物濃度，記錄不同膽鹽對(duì)敏感性測(cè)試菌株的 MIC 值。
48h之后，在全自動(dòng)生長曲線分析儀中每一個(gè)樣品管中取 200μL 菌液均勻的涂在哥倫比亞血瓊脂平板上，36°C±°1C培養(yǎng)48h，觀察平板上的菌落數(shù)。最小殺菌濃度 MBC 是膽鹽能夠殺死 99.9% 的細(xì)菌(降低3個(gè)數(shù)量級(jí))所需的最低藥物濃度，記錄不同膽鹽對(duì)敏感性測(cè)試菌株的MBC值。
通過比較對(duì)照品膽鹽與測(cè)試品膽鹽對(duì)于敏感性測(cè)試菌株的 MIC 和 MBC (見表4-7-1)，進(jìn)而評(píng)估測(cè)試樣品的抑菌能力，指導(dǎo)膽鹽、去氧膽酸鈉在培養(yǎng)基中的準(zhǔn)確用量，提高培養(yǎng)基的適用性。
表4-7-1 對(duì)照品膽鹽與測(cè)試品膽鹽對(duì)于敏感性測(cè)試菌株的 MIC 和 MBC 值
還可以比較分析不同結(jié)構(gòu)的膽汁酸對(duì)不同菌株的抑菌能力(見表4-7-2)。
表4-7-2 不同結(jié)構(gòu)膽鹽對(duì)于敏感性測(cè)試菌株的 MIC 和 MBC 值
通過實(shí)驗(yàn)，得知膽鹽的抑菌效果與膽汁酸羥基位置和所抑制的菌種相關(guān)。如抑制藤黃微球菌的效果比較，豬膽鹽(3??，6??，7??)>牛膽鹽(3??，7??，12??)>3號(hào)膽鹽(混合膽鹽)>脫氧膽鹽(3??，12??)；抑制表皮葡萄球菌時(shí)，豬膽鹽(3??，6??，7??)>脫氧膽鹽(3??，12??)>牛膽鹽(3??，7??，12??)>3號(hào)膽鹽(混合膽鹽)。
來源：《微生物培養(yǎng)基及其原材料質(zhì)量控制》電子書
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