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細胞完全培養(yǎng)基配置使用方法

發(fā)布時間:2023-06-30    瀏覽次數(shù):16789

細胞培養(yǎng)體系一般由以下四種(三種)組成:

名稱 體積 保存條件
基礎(chǔ)培養(yǎng)基500mL4°C、避光
添加劑5mL-20°C、避光
胎牛血清(FBS)0-50mL-20°C、避光
雙抗(青霉素/鏈霉素,P/S)5mL-20°C、避光

添加劑和雙抗通常濃度為 100X(100 倍工作濃度)。血清的添加比例有 0%(不添加),1%(5mL), 2%(10mL),5%(25mL),10%(50mL)幾種。【大多數(shù)實驗室使用的完全培養(yǎng)基配置方法為:450~500ml DMEM培養(yǎng)基+50ml FBS(胎牛血清)+5ml雙抗】

第一次使用時先將-20℃保存的添加劑、雙抗、FBS 轉(zhuǎn)移到 4℃溶解后,在滅菌后的百級潔凈等級環(huán)境中操 作,所使用的容器和移液耗材均需要進行過無菌處理。

首先將解凍的 FBS、添加劑和雙抗進行分裝,平均分裝成 5-10 份,留下本次配制所需要的量, 剩余的繼 續(xù)放回-20℃保存,之后按需取用融化后配制完全培養(yǎng)基,避免反復凍融。

建議用無菌的 50mL離心管 盛裝配置好完全培養(yǎng)基

配制方法:在每個 50mL 離心管中加入①500uL 添加劑、②500uL 雙抗、③50×血清百分比 mL 的胎牛血清、④(50×(1-血清百分比)-1)mL 的基礎(chǔ)培養(yǎng)基。配制完成后蓋上蓋子,顛倒混勻備用。

例如:在血清比例為 5%的條件下,50mL 離心管中各組分的體積分別為:
      基礎(chǔ)培養(yǎng)基:(50×(1-5%)-1)=46.5mL+
      添加劑:500uL +
      雙抗:500uL+
      血清:50×5%=2.5mL

配置好的培養(yǎng)基置于 4℃避光保存。由于添加劑中有很多重組蛋白,易發(fā)生降解,故配置好的完全培養(yǎng)基 有效期僅為 3-4 周,請盡快使用。因此建議每次配制 1-2 管(50-100mL),當然使用量大的情況下也可以 適量增加配置量。

P. S.:不建議客戶將全部的血清、雙抗、添加劑直接加入基礎(chǔ)培養(yǎng)中混勻使用,原因如下:

1. 500mL 的基礎(chǔ)培養(yǎng)基的體積較大,灌裝時體積波動很大,直接加入,無法準確地控制因子和血清的工作 濃度。

2. 配制好的培養(yǎng)基僅能在 4℃保存 3-4 周,如果期間沒用完,繼續(xù)使用會影響培養(yǎng)效果。如果是-20℃保存,可以延長保存時間,但是反復凍融也會影響完全培養(yǎng)基的效果。

3. 如果使用培養(yǎng)基時由于操作失誤導致污染,分裝能減少培養(yǎng)基的損失量。

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