關于GB4789.38-2012大腸埃希氏菌平板法常見問題分析
發(fā)布時間：2023-10-26 瀏覽次數(shù)：1613
自然界中，大腸埃希氏菌廣泛存在于人和溫血動物的腸道中，其測定數(shù)值反映出所在產品的衛(wèi)生狀況，進而推斷食品中腸道致病菌污染的可能性，因此其濃度范圍也常被賦予嚴格的限度要求，現(xiàn)行食品大腸埃希氏菌檢驗方法采用GB4789.38-2012。該標準中大腸埃希氏菌平板法在實施的過程中，應用狀況如何呢？
首先一起來看看GB4789.38-2012大腸埃希氏菌平板法具體操作：
很顯然，標準中采用的是VRBA傾注凝固后，再覆蓋一層VRBA-MUG的形式，那么這樣操作紫外燈下的效果如何呢？一起看一下,按此操作方法，菌落形態(tài)及熒光情況吧！
靈魂拷問：我知道VRBA中可發(fā)酵的糖為乳糖，指示劑為中性紅，發(fā)酵乳糖產酸的，指示劑變紅，大腸桿菌為紅色帶膽鹽沉淀環(huán)...那其他腸道菌都不帶嗎？萬一不帶沉淀環(huán)的與目標菌挨得近，哪里分得出是誰的沉淀環(huán)？
? 根據大腸桿菌的酶系反應，其含有的葡萄糖醛酸苷酶，作用于4-甲基傘形酮-β-D葡萄糖醛酸苷（簡稱MUG）的β糖醛酸苷鍵，使其水解，釋放的4-甲基傘形酮在360~366nm紫外燈下能夠產生藍白色熒光。知道該怎么做了吧？
—— 接下來，我們置于365nm紫外光下觀察。
結果紫外光下的熒光弱到幾乎看不見…
那么，問題來了：是菌的問題？培養(yǎng)基問題？還是方法問題？我們接著往下聊~
為了驗證此問題，我們繼續(xù)試驗。依然采用VRBA培養(yǎng)基+VRBA-MUG培養(yǎng)基、只有VRBA-MUG培養(yǎng)基以及環(huán)凱牌大腸桿菌顯色培養(yǎng)基（貨號CRM003)，測試菌用大腸桿菌、弗氏檸檬酸桿菌混合，分別傾注法和涂布法，同樣條件培養(yǎng)后結果：
| 傾注法：（1ml大腸桿菌+弗氏檸檬酸桿菌混合菌液) | |||
| VRBA傾注后覆蓋3-4mL VRBA-MUG | VRBA-MUG傾注 | 環(huán)凱牌大腸桿菌顯色培養(yǎng)基（貨號CRM003) | |
| 自然光下 |  |  |  表面及內部菌均顯色 |
| 紫外光下 |  弱熒光 |  僅表面菌熒光明顯 | / （無需紫外光下觀察） |
| VRBA+覆蓋3-4ml VRBA-MUG和VRBA-MUG直接傾注，在紫外光下計數(shù)，有漏檢風險。 | |||
大腸桿菌顯色培養(yǎng)基無需紫外燈下計數(shù)，安全，且菌落顏色清晰，方便性及特異性優(yōu)于國標方法。
| 涂布：(0.1ml大腸桿菌+弗氏檸檬酸桿菌混合菌液) | ||
| VRBA-MUG | 環(huán)凱牌大腸桿菌顯色培養(yǎng)基（貨號CRM003) | |
| 自然光下 |  |  |
| 紫外光下 |  | / |
| 對于涂布接種，VRBA-MUG表面接種因紫外光無遮擋可直達菌表面，平板表面菌熒光效果更佳，但因涂布法種量一般為0.1~0.4ml,因此，1ml樣液涂布至少3個平板，分別0.3ml、0.3ml、0.4ml。 | ||
