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FZ013BF2 溶藻弧菌核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48test

英文名稱:PCR Detection Kit for Vibrio alginolyticus (Fluorescent Probe Assay)

貨 號 :FZ013BF2

規(guī) 格 :48測試/盒

用途:用于食品、水產(chǎn)樣本中溶藻弧菌的檢測

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產(chǎn)品名稱:溶藻弧菌核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
英文名稱:PCR Detection Kit for Vibrio alginolyticus (Fluorescent Probe Assay)

產(chǎn)品編號與包裝規(guī)格:

編號 規(guī)格
FZ013BF248 測試/盒

產(chǎn)品簡介:本試劑盒適用于食品、水產(chǎn)樣本中溶藻弧菌的檢測。

檢測原理:基于Real Time PCR技術,針對溶藻弧菌特異性基因設計引物和熒光探針并優(yōu)化反應所需試劑組分,加入待檢樣品核酸即可進行擴增反應。在擴增過程中,熒光探針與目的基因片段結合,可被Taq酶分解并產(chǎn)生熒光信號,此時熒光定量PCR儀可識別該熒光信號,同時根據(jù)其強弱變化繪制出相應的實時擴增曲線,進而判定溶藻弧菌是否檢出。

溶藻弧菌核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)產(chǎn)品組分:

溶藻弧菌核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)產(chǎn)品組分

儲存條件與保質(zhì)期:-20℃儲存,有效期為12個月,避免反復凍融。

靈敏度:最低檢驗限達到 100 CFU/Test

所需其他材料和適用儀器:熒光定量PCR儀(具有能夠檢測FAM標記的熒光通道)、高速離心機、移液器、移液槍頭及離心管等。

溶藻弧菌核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)使用指南:

1,樣品前處理

   1) 樣品增菌液模板 DNA 的制備:
         a) 樣品增菌:參照NKML NO.156進行樣品制備和增菌,取樣品20g(mL),加入到含鹽2%的200mL堿性蛋白胨水中42.0±1.0℃培養(yǎng)18±2h;
         b) 吸增菌液1 mL到1.5 mL規(guī)格的無菌離心管中,6000 r/min離心5 min,完全去除上清;
         c) 加入30 μL裂解液,充分懸浮菌體,輕彈管壁消除氣泡,99℃加熱10 min;
         d) 12000 r/min離心15 min,上清即為粗提的DNA,可轉(zhuǎn)移至0.2 mL無菌離心管中,在-20℃下可長期保存。

   2) 可疑菌落模板 DNA 的制備:挑取可疑菌落,充分懸浮于預先加有30 μL裂解液的無菌離心管中,后按照上述步驟c)、d)操作。

2, 加樣、反應

   1) 按照需求取n個PCR反應管(n=待檢測樣品數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),從試劑盒中取出預混液,充分融化,渦旋振蕩后短暫離心,向以上每個PCR管中加入20 μL預混液。
   2) 向上述n個反應管中分別按順序加入陰性對照、待測樣品DNA、陽性對照各5 μL,加樣后立刻蓋緊管蓋,短暫離心,立即進行PCR擴增反應。
   3) PCR反應體系為25 μL,設置FAM檢測通道讀取,在反應階段2中60℃時收集熒光信號,具體程序如下:

反應階段 溫度 時間 信號收集 循環(huán)數(shù)
195°C30 sec 1
295°C5 sec } 40
60°C30 sec?
   注:對于ABI系列熒光定量PCR儀器,其反應體系中無需添加ROX,且在軟件設置時,在“Passive Reference”和“Quencher”處均選擇“None”。

3, 結果:一般情況下,可通過軟件自動設定的基線、閾值等直接讀取檢測結果。如需調(diào)整,可根據(jù)所使用儀器的自身情況(如噪聲等)以及選取的不同熒光通道進行調(diào)整。

   1) 質(zhì)量控制:陰性對照未出現(xiàn)明顯的S型擴增曲線或Ct值>37,陽性對照出現(xiàn)S型擴增曲線且其Ct值<30。若陰陽性對照不同時滿足上述條件,則本次檢測結果無效,應重新檢測或與產(chǎn)品技術支持聯(lián)系。

   2) 結果判讀:(根據(jù)反應所得Ct值判讀,具體見下表:)

Ct值 結果判讀
≤35溶藻弧菌陽性。
35~37建議重新檢測,若結果Ct≥37,則溶藻弧菌陰性,反之則為溶藻弧菌陽性。
≥37溶藻弧菌陰性。

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