無菌室是進行細菌、酵母、霉菌以及各類致病性微生物檢驗的關(guān)鍵場所，其是否達到無菌操作要求，內(nèi)部質(zhì)量控制體系是否完善直接關(guān)系到食品微生物學(xué)檢驗結(jié)果的準確性。

無菌室的整體布局

從總體布局上看，無菌室的墻壁、地面和天花板要求表面平整光滑、易于清洗，不易滲漏液體，并能抵抗常用消毒劑的腐蝕。無菌室一般要求要完全密閉，并保持好日常衛(wèi)生，以防止室外不凈氣體和部分昆蟲進入，與外界應(yīng)有完善的物流窗和高效空氣過濾除菌設(shè)備。

無菌室內(nèi)應(yīng)備有工作濃度的常用消毒液，如苯酚酸(堿)溶液，75％的酒精，0.1％的新潔爾滅溶液等等。

無菌室的位置一般要求建在人員流動較少的地方，距離普通的辦公環(huán)境或者微生物準備室要有一定的距離。無菌室內(nèi)必須配備相應(yīng)的緩沖工作間用于擺放專用白大褂或?qū)Ｓ靡旅钡取?/span>

無菌室中的物流窗應(yīng)避免與空氣產(chǎn)生直接對流，最好不要正對著無菌室大門；空調(diào)需有可靠的多重高效過濾除菌系統(tǒng)；所有照明和紫外燈電源總開關(guān)應(yīng)設(shè)置于無菌室門口或門外。無菌室整個布局設(shè)計應(yīng)按照人、物分離原則，防止交叉污染。

此外，在人員通道可配備高效風(fēng)淋室以減少實驗人員帶入的污染。對無菌室和其內(nèi)部的超凈工作臺、生物安全柜都必須進行定期監(jiān)測和日常維護，并有監(jiān)測和維護記錄。日常維護主要包括紫外線燈擦拭、濾網(wǎng)擦洗更換、空氣消毒及全面清潔衛(wèi)生等川。

無菌室的建材使用控制

用于無菌室建設(shè)的所有材料均應(yīng)符合消防和環(huán)保要求，具有耐腐蝕和易清潔的特點。無菌室的內(nèi)部裝修應(yīng)整齊、光滑、避免凹凸、所有角落最好設(shè)置為球弧體狀以避免灰塵長期堆積難以清掃和消毒。

無菌室的各個通道進出口應(yīng)采用門縫緊密且打開后能自動閉合的推拉式門，墻壁及吊頂應(yīng)采用隔熱防火、耐化學(xué)腐蝕、耐水分滲透、隔音且易清潔的新型建材以防止塵垢堆積、材料脫落、滋生霉菌、不易清潔等情況的發(fā)生。

總體上，無菌室應(yīng)盡量設(shè)計成完全封閉的模式，一般僅靠高效過濾系統(tǒng)與外界進行空氣交換。當前空氣潔凈技術(shù)已經(jīng)發(fā)展得比較成熟，在很多學(xué)科領(lǐng)域都得到了廣泛的應(yīng)用，目前很多食品微生物檢測用的無菌室也都已采用比較先進和方便易用的的層流凈化系統(tǒng)裝置，基本上都能保證食品微生物學(xué)檢驗過程中無菌狀態(tài)、恒溫恒濕、穩(wěn)定風(fēng)速風(fēng)量和空氣潔凈度的要求。

無菌室環(huán)境及凈化控制

無菌室無菌環(huán)境的質(zhì)量控制是微生物檢驗獲得準確數(shù)據(jù)極為重要的環(huán)節(jié)。食品微生物學(xué)檢驗對無菌的環(huán)境和無菌操作的要求非常嚴格，整個檢測過程始終要求在無菌狀態(tài)下以無菌操作方式進行，所以對無菌狀態(tài)的質(zhì)量控制是微生物檢驗結(jié)果準確可靠的保證。

操作人員要嚴格定期對無菌室消毒效果進行評價，同時要制定合理的環(huán)境監(jiān)測程序，對環(huán)境監(jiān)測結(jié)果進行數(shù)據(jù)分析，嚴格按照相應(yīng)國家標準設(shè)定的不同工作區(qū)域可接受的菌落數(shù)量，對出現(xiàn)超標情況的處理要進行文件化控制。

此外，無菌室內(nèi)的環(huán)境情況例如溫度和濕度等可能會影響無菌室內(nèi)的消毒滅菌效果，通常情況下溫度應(yīng)控制在22℃左右，相對濕度不超過65％會比較適宜。

整個無菌室應(yīng)采用先進高效層流空氣凈化系統(tǒng)以保證恒溫、恒濕、換氣量和空氣潔凈度的相關(guān)要求?？諝鈨艋到y(tǒng)中的高效過濾膜能對空氣中不同大小規(guī)格的塵埃粒子進行有效過濾，防止附著在塵埃粒子上的微生物污染無菌室；采用從頂部送風(fēng)、下側(cè)回風(fēng)的氣流組織方式既保證了潔凈度，又節(jié)約了能源。

在無菌室、人員通道及物流窗內(nèi)安裝紫外殺菌燈能對物體表面和空氣進行消毒；工作時風(fēng)淋室內(nèi)的高效過濾空氣能吹去附著在操作者工作服上的部分塵埃，物流窗可傳遞實驗用品和樣品，這些設(shè)計都能保證無菌室的潔凈要求。

同時高效空氣過濾系統(tǒng)通風(fēng)量能滿足人員的需要，較好解決傳統(tǒng)無菌室不能置換新鮮潔凈空氣、工作環(huán)境差等問題。

此外，應(yīng)定期對無菌室的無菌程度進行監(jiān)測，可參考醫(yī)藥工業(yè)潔凈室相關(guān)標準對于塵埃粒子、沉降菌、浮游菌等項目的限量對食品微生物無菌室進行定期測試。

沉降菌法有最簡單、最直觀，也最能真實地反映物體表面(特別是控制部位)自然污染程度的特點，故也可采用平板計數(shù)瓊脂和孟加拉紅瓊脂平板各3塊，等距離置于無菌室工作位置的一條對角線上，開蓋暴露15min，分別在36℃培養(yǎng)48h，28℃培養(yǎng)5d后計數(shù)沉降的細菌和霉菌及酵母的菌落數(shù)，若平均菌落數(shù)超過3CFU/皿，則應(yīng)當對無菌室空氣和無菌室內(nèi)的物體表面進行消毒以改善其無菌環(huán)境。

同時微生物無菌室應(yīng)制定切實有效的各項生物安全制度并嚴格執(zhí)行，例如在進入放置有生物安全柜的致病菌操作間大門要裝透明的可視玻璃，大門上要貼上相應(yīng)安全等級的“生物危害”圖標，并清晰附上緊急情況聯(lián)絡(luò)人的聯(lián)系方式。

在不同區(qū)域放置可自動關(guān)閉的專用垃圾桶，在裝紫外燈的區(qū)域如物流窗外要貼上相應(yīng)的“內(nèi)有紫外殺菌燈”等警示標識。

無菌室內(nèi)人員操作規(guī)范化控制

在無菌室內(nèi)進行食品檢驗前應(yīng)保證其無菌狀態(tài)，先打開空氣凈化系統(tǒng)和紫外燈，至少保證紫外燈對空氣和無菌室內(nèi)物體表面殺菌30min。

由于紫外線殺菌不會產(chǎn)生二次污染，因此，此方法優(yōu)于化學(xué)殺菌，保證了室內(nèi)人員及設(shè)備的安全。進入無菌區(qū)應(yīng)洗手、更衣、換鞋。戴帽子和口罩，以保證無菌物品存放區(qū)的空氣潔凈度。

無菌室一般僅限實驗操作人員進入，協(xié)助人員可在物流窗以外進行觀察或協(xié)助，實驗操作進行時人員不得頻繁進出，要嚴格保證風(fēng)淋設(shè)備的運行和各扇門的關(guān)閉狀態(tài)。

檢驗人員首先要嚴格保證自身的凈化，在進入無菌室前先用洗手液洗手后進入緩沖間換專用鞋和白大褂，在風(fēng)淋室風(fēng)淋后進入無菌室。

開始檢驗時用75％酒精對雙手進行擦拭消毒。操作人員進入無菌室操作，動作要輕，幅度要小，盡量避免不必要的走動；檢驗時要盡量避免頻繁談話，盡量縮短無菌檢驗樣品在空氣中的暴露時間；

應(yīng)通過物流窗傳遞實驗物品，人員進出要隨手關(guān)門；應(yīng)最大限度縮短在無菌室內(nèi)的操作時間，能在無菌室外進行的準備工作，應(yīng)杜絕在無菌室內(nèi)進行；要嚴格保證無菌室的清潔度，檢驗完畢可用棉花蘸取75％酒精擦拭工作臺面，人員最后離開無菌室后再打開無菌室和超凈工作臺內(nèi)的紫外燈照射30min后關(guān)閉。

無菌物品的使用和保存控制

無菌是指在環(huán)境中一切有生命活動的微生物的營養(yǎng)細胞及其芽孢或孢子都不存在的狀態(tài)。

要保證食品微生物指標檢驗的準確性，就必須做到環(huán)境無菌、儀器無菌、培養(yǎng)基無菌、人員無菌、操作無菌這5個無菌。一般要求微生物液體培養(yǎng)基要進行高壓蒸汽滅菌，培養(yǎng)皿和吸管等物品應(yīng)該用報紙包嚴實進行170℃干熱滅菌2h。

干熱滅菌后的物品應(yīng)放置于烘箱內(nèi)或無菌室的超凈工作臺內(nèi)，保證報紙包裝無破損并盡快使用；滅菌后的液體培養(yǎng)基若不立即使用應(yīng)置于4℃冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩?/span>

無菌物品存放的有效期，受到滅菌后物品的干燥度，包裝材料、封口的嚴密性、滅菌條件和儲存環(huán)境等諸多因素影響。對于干熱滅菌后的無菌培養(yǎng)皿和吸管等物品，若能保證報紙無破損并能阻擋空氣中微生物滲入，其有效期一般能適當延長，至少能保存一個月的時間；對于滅菌后放置于4℃冰箱內(nèi)的液體培養(yǎng)基最好不要超過一周。

此外，保存期受到環(huán)境影響較大，對于潮濕天氣和多雨季節(jié)應(yīng)縮短其保存天數(shù)。

無菌室的日常管理監(jiān)測控制

一般在無菌室內(nèi)不要擺放太多不必要的實驗物品以減少無菌室內(nèi)物品污染的幾率，只需要放置酒精燈、接種環(huán)、無菌剪刀和鑷子，消毒酒精等常規(guī)用品和電子天平、均質(zhì)器、水浴鍋等儀器設(shè)備，物品要歸位放置，不可隨意擺放移動。

無菌室無菌程度要定期監(jiān)控并及時進行適當消毒處理；紫外線燈管表面也要防止灰塵堆積，及時用酒精棉球擦拭，有損壞的要及時更換。有條件的檢測室可用塵埃粒子計數(shù)器定期測定工作區(qū)的潔凈度，一年左右可聯(lián)系廠家清理或更換高效空氣過濾器的濾芯。

此外，當檢測人員患感冒等呼吸道疾病時應(yīng)暫時避免進入無菌室。

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